請詳細介紹一下生物素修飾PLA微球的制作過程
2025-12-02
[87]
生物素修飾PLA微球是通過化學方法將生物素共價偶聯(lián)至PLA微球表面，形成兼具PLA生物相容性與生物素特異性結(jié)合能力的功能材料。其制作過程可分為表面預處理、生物素偶聯(lián)、后處理與驗證三個核心階段，具體步驟及技術(shù)要點如下：
一、表面預處理：引入活性官能團
PLA微球表面需通過化學或物理方法引入羧基、氨基等活性官能團，為生物素偶聯(lián)提供反應位點。常用方法包括：
等離子體處理：利用低溫等離子體（如氧氣、氮氣等離子體）轟擊PLA微球表面，產(chǎn)生自由基并引發(fā)氧化反應，生成羧基、羥基等含氧官能團。
化學接枝：通過硅烷化試劑（如APTES）或羧基化試劑（如琥珀酸酐）與PLA表面的羥基反應，引入氨基或羧基。例如，將PLA微球浸泡于APTES的乙醇溶液中，通過硅氧鍵形成氨基化表面。
紫外線接枝：在紫外線照射下，PLA微球表面產(chǎn)生自由基，引發(fā)單體（如丙烯酸）接枝聚合，形成羧基化表面。
二、生物素偶聯(lián)：形成穩(wěn)定共價鍵
根據(jù)預處理引入的官能團類型，選擇合適的交聯(lián)劑將生物素偶聯(lián)至PLA微球表面。常用方法包括：
EDC/NHS交聯(lián)法（羧基-氨基偶聯(lián)）：
原理：EDC（1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺）活化羧基，形成活性中間體，NHS（N-羥基琥珀酰亞胺）穩(wěn)定中間體，促進與氨基反應形成酰胺鍵。
步驟：
將預處理后的PLA微球分散于MES緩沖液（pH 5.5-6.0）中，加入EDC和NHS，室溫攪拌活化1小時。
離心洗滌去除未反應的EDC/NHS，重懸于PBS緩沖液（pH 7.4）。
加入生物素-氨基己酸（生物素衍生物，含末端氨基），室溫反應2-4小時，形成生物素修飾的PLA微球。
戊二醛交聯(lián)法（氨基-氨基偶聯(lián)）：
原理：戊二醛作為雙功能交聯(lián)劑，其醛基與氨基反應形成希夫堿鍵，實現(xiàn)氨基化PLA微球與生物素衍生物（如生物素-琥珀酰亞胺酯）的偶聯(lián)。
步驟：
將氨基化PLA微球分散于PBS緩沖液中，加入戊二醛（終濃度2.5%），室溫攪拌反應1小時。
離心洗滌去除未反應的戊二醛，重懸于PBS緩沖液。
加入生物素-琥珀酰亞胺酯，室溫反應2小時，形成生物素修飾的PLA微球。
三、后處理與驗證：確保修飾質(zhì)量
純化：通過離心、洗滌（如PBS洗滌3次）去除未反應的生物素及交聯(lián)劑，避免非特異性結(jié)合干擾。
干燥：將純化后的微球冷凍干燥或真空干燥，獲得固體粉末，便于儲存和運輸。
驗證：
形貌與粒徑：利用掃描電子顯微鏡（SEM）或動態(tài)光散射儀（DLS）觀察微球形貌，驗證粒徑均一性（如粒徑范圍1-100μm）。
修飾密度：通過蛋白定量法（如BCA法）檢測生物素修飾量，或利用熒光標記的親和素（如鏈霉親和素-FITC）與生物素結(jié)合，通過熒光強度定量修飾密度。
功能驗證：結(jié)合生物素化抗體或核酸，驗證微球?qū)δ繕朔肿拥奶禺愋越Y(jié)合能力（如ELISA、流式細胞術(shù)）。
四、制作示例：EDC/NHS交聯(lián)法流程
制備PLA微球：采用乳化溶劑揮發(fā)法，將PLA溶解于二氯甲烷中，加入乳化劑（如PVA），超聲乳化后揮發(fā)溶劑，固化得到空白PLA微球。
表面羧基化：將PLA微球浸泡于琥珀酸酐的DMSO溶液中，室溫攪拌反應24小時，洗滌干燥后獲得羧基化PLA微球。
生物素偶聯(lián)：
將羧基化PLA微球分散于MES緩沖液中，加入EDC和NHS，活化羧基1小時。
離心洗滌后重懸于PBS，加入生物素-氨基己酸，反應4小時。
離心洗滌純化，獲得生物素修飾的PLA微球。
驗證：通過SEM觀察微球形貌，BCA法檢測生物素修飾量，結(jié)合鏈霉親和素-FITC驗證熒光信號，確認修飾成功。
關(guān)于我們:
陜西星貝愛科生物科技經(jīng)營的產(chǎn)品種類包括有：合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性納米顆粒、納米金及納米金棒、近紅外熒光染料、活性熒光染料、熒光標記物、蛋白交聯(lián)劑、小分子PEG衍生物、點擊化學產(chǎn)品、樹枝狀聚合物、環(huán)糊精衍生物、大環(huán)配體類、熒光量子點、透明質(zhì)酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳納米管、富勒烯，二氧化硅及介孔二氧化硅，聚合物微球，近紅外熒光染料，聚苯乙烯微球，上轉(zhuǎn)換納米發(fā)光顆粒，MRI核磁造影產(chǎn)品，熒光蛋白及熒光探針等等。
溫馨提示：僅用于科研，不能用于人體！
相關(guān)產(chǎn)品：
BSA修飾PE微球/聚乙烯
PTFE Particles, 100 nm
氨基修飾的PTFE微球
PDLA微球，PDLA Particles(聚右旋乳酸)
氨基修飾的PDLA微球
羧基修飾的PDLA微球
鏈霉親和素修飾的PDLA微球
生物素修飾的PDLA微球
氨基多孔PLGA微球
