NHS修飾96孔板的制備方法主要包括以下步驟，這些步驟基于共價結合原理，通過NHS與碳二亞胺（如EDC）聯用，活化孔板表面的羧基，進而與目標分子中的氨基發生反應，形成穩定的酰胺鍵：

一、準備階段

1. 孔板選擇：選擇通常為聚苯乙烯或聚丙烯材質的96孔板。

2. 表面羧基化：若孔板表面無羧基，需通過等離子體處理、化學氧化或硅烷化等方法引入羧基。

3. 清洗孔板：用去離子水或PBS緩沖液沖洗孔板，去除表面雜質。

二、活化階段

1. 配制EDC/NHS溶液：將EDC（如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺）和NHS按一定比例（如1:1）溶解在緩沖液（如MES，pH 4.5-6.0）中。

2. 加入孔板：每孔加入適量EDC/NHS溶液，室溫孵育15-30分鐘，使羧基充分活化。

3. 清洗孔板：棄去活化液，用緩沖液沖洗孔板，以去除未反應的EDC和NHS。

三、固定階段

1. 加入目標分子溶液：加入含目標分子（如抗體、蛋白質）的溶液，室溫孵育1-2小時或4℃過夜，使NHS酯與氨基反應形成酰胺鍵。

2. 清洗孔板：棄去固定液，用緩沖液沖洗孔板，以去除未結合的目標分子。

四、封閉階段

1. 加入封閉劑：加入封閉劑（如5% BSA或脫脂奶粉），室溫孵育1-2小時，封閉未反應的羧基，減少非特異性吸附。

2. 清洗孔板：棄去封閉液，用緩沖液沖洗孔板，干燥后密封保存（通常4℃可保存數月）。

五、使用前預處理

使用前需根據實驗需求進行預處理，如洗滌、孵育等。

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