CY5-阿侖膦酸的制備方法主要是通過阿侖膦酸鈉的伯氨基與CY5-NHS酯或CY5-maleimide反應形成共價鍵，具體如下：

1. 反應原理：阿侖膦酸鈉屬于氨基膦酸類化合物，含有一個伯氨基和兩個膦酸基（–PO?H?）取代的乙基骨架。膦酸基具有高度親骨性，能與羥基磷灰石強結合，是阿侖膦酸鈉靶向骨組織的關鍵基團。CY5的NHS酯或maleimide衍生物可與伯氨基反應，形成穩定的酰胺鍵或硫醚鍵。

2. 反應條件：

• 緩沖液：通常在pH約7.5-8.5的緩沖液中進行反應，以促進高效偶聯。

• 溫度：反應溫度控制在室溫，以避免高溫對反應物的影響。

• 時間：反應時間一般為4-12小時，具體時間取決于反應物的濃度和反應條件。

• 摩爾比：阿侖膦酸鈉與CY5-NHS酯或CY5-maleimide的摩爾比一般為1:1至1:2，以確保反應全。

3. 反應過程：在緩沖液中，將阿侖膦酸鈉與CY5-NHS酯或CY5-maleimide按適當摩爾比混合，室溫攪拌反應數小時。

4. 純化與鑒定：

• 純化：利用反相HPLC純化產物，去除未反應的染料和游離藥物。

• 鑒定：通過質譜確認偶聯產物分子量，NMR驗證酰胺鍵或硫醚鍵的形成。紫外-可見光譜和熒光光譜檢測CY5特征峰，保證熒光性能。

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