FITC-LPS（異硫氰酸熒光素標(biāo)記脂多糖）的制備方法主要基于脂多糖（LPS）與FITC的共價(jià)結(jié)合反應(yīng)，以下是一種詳細(xì)且通用的制備流程：

一、LPS預(yù)處理

1. 解離聚集狀態(tài)：將LPS溶解于0.5%脫氧膽酸鈉溶液中，在0℃下攪拌20分鐘。這一步驟的目的是解離LPS的聚集狀態(tài)，使其形成單鏈結(jié)構(gòu)，有利于后續(xù)與FITC的反應(yīng)。

2. 調(diào)節(jié)pH值：使用1mol/L HCl將溶液的pH值調(diào)節(jié)至5.0。這一步驟的目的是促進(jìn)LPS氨基的質(zhì)子化，為后續(xù)與FITC的反應(yīng)提供適宜的化學(xué)環(huán)境。

二、FITC標(biāo)記反應(yīng)

1. 準(zhǔn)備FITC溶液：將FITC溶解于0.1mol/L磷酸鈉緩沖液（pH9.5）中，制備成FITC溶液。

2. 混合反應(yīng)：將上述FITC溶液加入到經(jīng)過預(yù)處理的LPS溶液中，在37℃下避光孵育3小時(shí)。這一步驟中，F(xiàn)ITC的異硫氰酸酯基團(tuán)與LPS分子上的氨基發(fā)生親核加成反應(yīng)，形成穩(wěn)定的硫脲鍵，從而實(shí)現(xiàn)LPS的熒光標(biāo)記。

三、純化與后處理

1. 離心分離：反應(yīng)結(jié)束后，將混合物在4℃下與磷酸鈉溶液分離，通過離心去除未反應(yīng)的FITC。

2. 透析去除雜質(zhì)：將離心后的上清液進(jìn)行透析處理，以去除小分子雜質(zhì)，如未反應(yīng)的FITC、磷酸鈉等。

3. 獲得高純度FITC-LPS：經(jīng)過透析處理后，即可獲得高純度的FITC-LPS溶液。該溶液可在2-8℃下避光保存數(shù)月，以穩(wěn)定使用。

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